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C11 BODIPY 581/591实验说明


C11 BODIPY 581/591化学结构与性能分析

   C11 BODIPY 581/591是一种BODIPY(氟硼荧)衍生物,一种脂质过氧化的荧光探针,其结构为BODIPY的α不对称取代,一端为丁二烯苯基,与母体形成一个大共轭结构,使此侧的原子处于同一个平面;另一端为C11(十一酸)。独特的化学结构让C11 BODIPY 581/591具有良好的光稳定性、荧光伪影很低、并能轻松进入细胞膜。在细胞膜内,C11 BODIPY 581/591的丁二烯部位与ROS(活性氧)发生氧化还原反应,其充当还原剂作用,发射波长由591nm(还原型)红移至510nm(氧化型),激发波长分别为581nm(还原型)、500nm(氧化型)。无论是氧化型,还是还原型,其主体骨架保持不变,均具有良好的亲脂性,均不会自发离开细胞膜磷脂双分子层,还原态和氧化态处在磷脂双分子层的两个不同区域,离双分子层中心距离为18Å和<7.5Å的位置。

    C11 BODIPY 581/591 还原态和氧化态发射波光谱能很好分开,具有高量子产量,低浓度标记即可,对氧自由基、过氧亚硝酸盐比较敏感,对超氧化物、NO、铁离子、H2O2不敏感。常用于评价活细胞内脂质过氧化和抗氧化性能的研究。

C11 BODIPY 581/591空间结构

C11 BODIPY 581/591作为脂质过氧化荧光探针,检测铁死亡

   C11 BODIPY 581/591也可用于测定铁死亡(Ferroptosis ),铁死亡是一种铁依赖性的,区别于细胞凋亡、细胞坏死、细胞自噬的新型的细胞程序性死亡方式。铁死亡的主要机制是,在二价铁或酯氧合酶的作用下,催化细胞膜上高表达的不饱和脂肪酸,发生脂质过氧化,从而诱导细胞死亡;此外,还表现为抗氧化体系(谷胱甘肽系统)的调控核心酶GPX4的降低。在铁死亡过程中,我们通常认为二价铁与H2O2发生芬顿反应(Fenton reaction),生成了羟基自由基·OH,羟基自由基具有极强的氧化能力,C11 BODIPY 581/591检测铁死亡,主要在细胞膜内与自由基发生反应。

铁死亡(Ferroptosis )反应机制

化学信息

货号:ajci64572
CAS:217075-36-0
分子式:C30H34BF2N2O2 • H

分子量:504.4
纯度:>99%
存储:Store at -20°C

溶解:30mg/ml in DMSO

我司所提供的包装及价格如下表
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实验步骤(来自文献,仅供参考)

1.将1mg的C11 BODIPY 581/591样品(货号:ajci64572)溶于198.2554 uL DMSO中,制备10mM存储液。

2.培养合适密度的目标细胞,适当处理以建立相关细胞模型(如可利用某些小分子药物处理),然后加入适当C11 BODIPY 581/591,使得最终浓度为5 um,孵育1小时。(注:该探针比较灵敏,使用较低浓度就能检测到,大部分参考文献使用2 um-10 um,200ug实际上可以用很多次,以最终5um的浓度,稀释后体积为1mL计算,200ug可以使用79次;如果使用2.5 um,可以使用158次)

一.流式检测法:

    为了去除多余的染料,用PBS洗涤细胞两次以上,之后用胰酶消化,重悬在含5% FBS的PBS中,用流式细胞仪,在488nm-565nm激光器激发,在FL1通道测量505nm-550nm对应的信号,在FL2通道测量580nm以上的信号。当C11 BODIPY 581/591的不饱和丁二烯部分在细胞膜内与活性氧(ROS)发生氧化还原反应,导致其最大发射荧光从591nm红移至510左右,并且与脂质活性氧的产生成正比。[1]

一.共聚焦荧光显微镜检测法:

   同样需要用PBS洗涤细胞两次以上,利用共聚焦荧光显微镜,分别用488nm-565nm激光器激发,收集相关荧光信号图像,根据测定的荧光信号算数平均值±SEM,用以量化分析脂质过氧化细胞。[2]  未氧化的C11 BODIPY 581/591呈现红色,氧化的呈绿色。

参考文献:

[1] Ferroptosis is an autophagic cell death process. Cell Res. 2016 Sep;26(9):10 21-32.

[2] Alpha synuclein aggregation drives ferroptosis: an interplay of iron, calcium and lipid peroxidation. Cell Death Differ. 2020 Apr 27.

恭喜以下科学家使用我司C11 BODIPY 581/591发表SCI论文:

Advanced Healthcare Materials.doi:10.1002/adhm.202202150 (IF:11.0,Q1)



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