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Lyso Tracker Red溶酶体荧光探针的使用


Lyso-Tracker Red基本信息

Lyso-Tracker Red是溶酶体红色荧光探针,也属于Bodipy染料家族成员之一,最大激发/发射波长是577/590 nm。由于结构上有Bodipy的荧光基团和弱碱基,同时具备一定的脂溶性,使得可以穿过细胞膜,选择性地在酸性环境下聚集到溶酶体上,并发出红色荧光,广泛用来观察溶酶体内部生物合成及相关发病机理。


货号: ajcx12178

CAS: 231946-72-8

别名: Lyso Tracker Red DND-99;Bodipy 577/590;Lyso-Tracker Red

分子式: C20H24BF2N5O

分子量: 399.25

纯度: >98%

溶解度:DMSO : 5 mg/mL (12.52 mM; Need ultrasonic)

储存: Store at -20°C, protect from light

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实验原理

Lyso-Tracker Red是一种碱性荧光染料,它能够在细胞内的酸性环境下结合到溶酶体上。由于溶酶体内的pH通常较低(约4.5-5.5),Lyso-Tracker Red能够特异性与溶酶体内的蛋白和脂类结合,并发出红色荧光。这使得细胞内的溶酶体能够通过荧光显微镜清晰可见,从而定量分析细胞溶酶体的数量、大小和活性等特征。

Lyso Tracker Red结构图

Lyso Tracker Red用来标记溶酶体的实验步骤

  1. 1.配制储备液:通常配制1mM作为储备液,以1mg包装为例,只需加入2.5mL的DMSO即为1mM,在溶解时可适当水浴加热,超声以助溶。Lyso Tracker Red的工作液浓度比较稀,一般用50nM即可。

  2. 2.细胞处理:将要研究的细胞进行培养,并在合适的时间点进行处理,如对实验组添加药物刺激。

  3. 3.细胞悬浮染色:(1)悬浮细胞:悬浮细胞经4°C、1000g离心3-5分钟,弃去上清液,使用PBS清洗两次,每次5分钟。(2)贴壁细胞:使用PBS清洗两次,加入胰酶消化细胞,消化完成后经1000g离心3-5min。(3)使用0.5-1mL工作液重悬约106个细胞,室温避光孵育5-30分钟。不同细胞最佳孵育时间不同,请根据具体实验需求自行摸索。(4)孵育结束后,经1000g离心5分钟,去除上清液,加入PBS清洗2-3次,每次5分钟。(5)用预温的无血清细胞培养基或PBS重悬细胞,通过荧光显微镜或流式细胞术观察。

  4. 4.细胞贴壁染色:(1)在无菌盖玻片上培养贴壁细胞。(2)从培养基中移走盖玻片,吸出过量的培养基,将盖玻片放在潮湿的环境中。(3)从盖玻片的一角加入100μL的染料工作液,轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。(4)室温避光孵育5-30分钟,不同的细胞最佳培养时间不同。(5)孵育结束后吸弃染料工作液,用预温的培养液洗盖玻片2~3次。

染色效果示意图如下:

Lyso-Tracker Red用来标记溶酶体染色示意图

(C,D)为有或没有CQ(氯喹)(10μM)的ZAS( zymosan activation serum)4小时后,通过用Lyso-Tracker Red(酸性细胞内区室的指示剂)染色,发现溶酶体的酸化受损。使用共聚焦显微镜获得图像,并使用Leica共聚焦软件量化细胞中 Lyso-Tracker Red 的平均荧光强度。(E,F)从Lyso-Tracker Red染色后进行流式细胞术分析获得的代表性直方图表明,在含有ZAS有或没有CQ(10μM)4小时后,细胞中的Lyso-Tracker Red信号和平均荧光强度降低。实际检测效果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异,数据来源scientific reports,Article number: 8643 (2017).



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