Biotin-XX Tyramide Reagent|安捷凯

Background

Biotin-XX Tyramide Reagent is a biotin derivative for enzyme-mediated tyramide signal amplification (TSA) . Biotin-XX Tyramide Reagent utilizes horseradish peroxidase (HRP) to catalyze the covalent deposition of a biotin label adjacent to an immobilized enzyme. The deposited label can be detected with a streptavidin conjugate for imaging under bright field or fluorescence microscopy. The labeling reaction is fast (less than 10 minutes) ^[1]. Biotin-XX Tyramide Reagent can be used to increase the sensitivity of immunohistochemistry ^[2].

参考文献:
[1] Hopman AH, Ramaekers FC, Speel EJ. Rapid synthesis of biotin-, digoxigenin-, trinitrophenyl-, and fluorochrome-labeled tyramides and their application for In situ hybridization using CARD amplification. J Histochem Cytochem. 1998 Jun;46(6):771-7.
[2] Freedman LJ, Maddox MT. A comparison of anti-biotin and biotinylated anti-avidin double-bridge and biotinylated tyramide immunohistochemical amplification. J Neurosci Methods. 2001 Nov 15;112(1):43-9.

Biotin-XX Tyramide Reagent是一种酶介导的酪胺信号放大（TSA）的生物素衍生物。利用辣根过氧化物酶（HRP）催化生物素标记物与固定化酶相邻的共价沉积，可用链霉亲和素缀合物检测沉积标记，用于在明场或荧光显微镜下成像，标记反应速度快（少于10分钟）^[1]。常用于提高免疫组织化学灵敏度^[2]。

Protocol

本方案仅提供指导，应根据您的实际需求进行修改
1.酪胺信号扩增（TSA）操作准备：参考该篇文献方法 ^[1]，TSA按如下方法进行准备，Biotin-XX Tyramide（目录：GC12033）、抗荧光淬灭封片液(含DAPI)（目录号：GC26283）、HRP-conjugated Streptavidin （目录号：GC26343）、Streptavidin-FITC（目录号：GC19886）、TNT缓冲液（pH 7.5）(包含0.1 M Tris-HCl 、0.15 M NaCl和0.05% Tween 20) 、TNB缓冲液（TNT缓冲液+0.5％BSA）。
2. HRP Streptavidin binding结合：
①用TNB缓冲液封闭带有生物素标记的HeLa细胞30分钟。
②在TNB缓冲液中以1:1000稀释HRP Streptavidin binding，加入 HeLa细胞中并孵育30分钟。
③用TNT缓冲液洗涤细胞三次。(TNB缓冲液中BSA作为封闭剂)。
3.TSA 扩增：
①将 HeLa 细胞在扩增工作液中封闭10分钟（扩增工作液含1 μg/mL 生物素-XX-酪酰胺试剂（BXXP）和 1 mM H₂O₂溶解于 0.1 M 硼酸盐缓冲液（pH 8.5）），
②用 TNT 缓冲液洗涤三次。
4. Streptavidin-FITC 结合：
①用 TNB 缓冲液封闭带有生物素标记的 HeLa 细胞 20 分钟。
②在 TNB 缓冲液中加入 1.0 μg/mL Streptavidin-FITC 后加入 HeLa 细胞并孵育 30 分钟。
③用 TNT 缓冲液清洗细胞三次。
5.荧光显微镜检测：
①将抗荧光淬灭封片液(含DAPI) （10 μL）滴加到显微镜载玻片上。

②用尖头镊子将装有 HeLa 细胞的玻璃盖玻片从 24 孔板中取出，滴加含有DAPI的抗褪色封固剂（细胞面朝下）。

③用荧光显微镜在495nm/525nm (绿色) 的激发光和发射光条件下进行观察。