Acridine Orange
Acridine Orange是一种可穿透细胞的核酸选择性荧光染料， Acridine Orange可与DNA或RNA结合时产生荧光，与双链DNA结合时产生绿色荧光（激发光为488nm；发射光为530nm绿色荧光）。
此产品仅用于科学研究，我们不为任何个人用途提供产品和服务
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包装价格促销价数量
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10g￥1641.000.00- +
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25g￥2891.000.00- +
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5g￥1125.001125.00- +
- 货号: ajci66726
- CAS: 494-38-2
- 别名: 吖啶橙,NSC 194350
- 分子式: C17H19N3
- 分子量: 265.4
- 纯度: ＞98%
- 溶解度: 0.3mg/mL in ethanol, 20mg/mL in DMSO, 2mg/mL in DMF
- 储存: Store at -20°C, protect from light
- 库存: 现货
Background
Acridine Orange is a cell-permeable, nucleic-acid-selective fluorescent dye. When bound to nucleic acids, Acridine Orange emits fluorescence: upon intercalation into double-stranded DNA produces green fluorescence (excitation 488nm, emission 530nm). Because Acridine Orange associates with DNA and RNA to different extents, Acridine Orange binding to single-stranded DNA or RNA yields orange to red fluorescence (excitation 488nm, emission 640nm). Consequently, Acridine Orange is commonly employed to distinguish normal, apoptotic, and necrotic cells.
Acridine Orange是一种可穿透细胞的核酸选择性荧光染料，Acridine Orange可与DNA或RNA结合时产生荧光，与双链DNA结合时产生绿色荧光（激发光为488nm；发射光为530nm绿色荧光）。Acridine Orange与细胞中DNA和RNA结合量存在差别，Acridine Orange与单链DNA或RNA结合量结合量多发桔黄色或桔红色荧光（激发光为488nm；发射光为640nm）。因此，常被用于鉴别正常细胞、凋亡细胞及坏死细胞。
Protocol
本方案仅提供一个指导，请根据您的具体需要进行修改。
1、制备Acridine Orange染色液
（1）Acridine Orange染料储存液: 使用DMSO将Acridine Orange溶解成1mg/ml的储存液。注意:未使用的储存液建议分装后于-4℃或-20℃避光保存（在氮气下储存），避免反复冻融。
（2）Acridine Orange染料工作液制备:用合适的缓冲液(如:无血清培养基，HBSS或PBS)稀释储存液，配制浓度为0.5-20μg/ml的Acridine Orange工作液。注意: 请根据实际情况调整工作液浓度，现用现配
2、细胞的DNA和RNA染色
(1) 收集细胞悬液，将约0.2ml/份的原始细胞悬液转移至2/5mL体积的小玻璃或塑料管中, 放置在冰上冷却；
(2) 缓慢加入0.4mL预冷的细胞透化液，将细胞置于冰上静置约15s；
(3) 缓慢加入1.2mL预冷的Acridine Orange工作液，冰上避光孵育2-15min；
(4) 使用流式细胞仪测量并记录细胞荧光，在488nm处激发，通过发射滤光片和分色镜区分绿色荧光（在530nm处测量）处的dsDNA和红色发光（优选在640nm以上测量）处的RNA，Acridine Orange结合ssDNA后的激发光/发射光波长为488/650nm。
3、细胞贴壁染色（冰上操作）
（1）在无菌盖玻片上培养贴壁细胞；
（2）从培养基中移走盖玻片，吸出过量的培养基，将盖玻片放在潮湿的环境中；
（3）从盖玻片的一角加入100μl染料工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞，冰上避光孵育2-15min；
（4）吸弃染料工作液，使用培养液清洗盖玻片2~3次，通过荧光显微镜进行观察。
4、检测
（1）可通过荧光显微镜，或是流式细胞仪检测Acridine Orange标记细胞情况（Ex: 488nm; Em: 530nm绿色荧光，640nm橙色荧光）。
注意事项：
（1）细胞如需固定后染色，建议使用70%乙醇进行固定，冰上固定≥2小时，固定后使用预冷的PBS漂洗1-2次，除去所有乙醇，而后按照上述步骤进行染色；
（2）荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭；
（3）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
参考文献:
[1] Hu P, Wang J, Qing Y, et al. FV-429 induces autophagy blockage and lysosome-dependent cell death of T-cell malignancies via lysosomal dysregulation. Cell Death Dis. 2021 Jan 13;12(1):80.
