Suc-AAPF-pNA

Suc-AAPF-pNA (Suc-Ala-Ala-Pro-Phe-pNA) 是一种对硝基苯胺 (pNA) 显色底物，Km 为 1.7 mM。Suc-AAPF-pNA 的裂解可以释放出 4-硝基苯胺，其颜色为黄色，可以通过分光光度法进行测量。Suc-AAPF-pNA 可用于测量人中性粒细胞中游离和膜结合的组织蛋白酶 G。

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货号: ajci74162
CAS: 70967-97-4
别名: N-琥珀酰-丙酰氨-丙酰氨-脯酰氨-苯丙氨酸对硝基酰苯胺,Suc-Ala-Ala-Pro-Phe-pNA
分子式: C30H36N6O9
分子量: 624.7
纯度: ＞98%
溶解度: DMF: 5 mg/ml,DMSO: 5 mg/ml,DMSO:PBS (pH 7.2) (1:1): 0.5 mg/ml
储存: Store at -20°C
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Background

Suc-AAPF-pNA is a chromogenic substrate that can be cleaved by cathepsin G (Km = 1.7 mM), subtilisins, chymotrypsin (Km = 60 &#181M), chymase (Km = 4 mM), and cyclophilin, but not neutrophil elastase. Release of p-nitroanilide is monitored at 405-410 nm. This substrate can be used for inhibitor screening and kinetic analysis.

Suc-AAPF-pNA 是一种显色底物，可被组织蛋白酶 G (Km = 1.7 mM)、枯草杆菌蛋白酶、胰凝乳蛋白酶 (Km = 60 &#181M)、糜蛋白酶 (Km = 4 mM) 和亲环蛋白裂解，但不能被中性粒细胞裂解弹性蛋白酶。在 405-410 nm 监测对硝基苯胺的释放。该底物可用于抑制剂筛选和动力学分析。

Protocol

此方法仅提供一个指导，请根据您的具体需要进行修改。

1. 溶液配制

（1）储存液：用DMSO溶解Suc-AAPF-pNA，终浓度为10 mM。

注意:未使用的储存液分装后在-20℃避光保存，避免反复冻融。

（2）工作液：用实验缓冲液稀释储存液到所需的工作浓度，例如：0.2mM。

注意：最佳的工作浓度请根据实际情况调整或参阅文献自行设置梯度浓度进行摸索。工作液必须现配现用。

2. Suc-AAPF-pNA对蛋白酶切割的敏感性测定[1](来自文献,仅做参考)

（1）准备材料：底物Suc-AAPF-pNA、活性酶、PBS缓冲液、96孔微量滴定板、微量滴定板读数仪。

（2）反应体系：向每个孔中加入显色底物Suc-AAPF-pNA（5μl、最终浓度为0.2 mM）、活性酶（几微升，量取决于酶活性），添加PBS使最终体积达到200 μl。

（3）反应条件：在特定温度下进行反应，如20°C。

（4）使用微孔板读数器在405 nm处分光光度测量吸光度。在以下时间点进行测量：0、20、40、60、120、180、240、300 和 360 分钟。对照：为每种底物设置一个空白孔，不添加任何酶。

（5）数据收集和分析：进行三次反应，在每个时间点减去空白测量值，使用三个反应的平均吸光度进行绘图和分析。

注意事项：该方案为使用Suc-AAPF-pNA对蛋白酶切割的敏感性测定提供指导。可以根据其他文献和具体实验要求进行调整。

References:

[1] Fu Z, Akula S, Qiao C, et al. Duodenases are a small subfamily of ruminant intestinal serine proteases that have undergone a remarkable diversification in cleavage specificity[J]. PLoS One, 2021, 16(5): e0252624.