FeRhoNox-1(Fe2+ indicaton) 是一种用于检测活细胞内亚铁离子水平的高灵敏度红色荧光探针,结合亚铁离子后的最大激发波长和发射波长分别为540/575 nm。
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FeRhoNox-1(Fe2+ indicaton)?is a highly sensitive red fluorescent probe for detecting ferrous ion levels in living cells. After entering cells, FeRhoNox-1 tends to accumulate in the Golgi apparatus and generate an irreversible red fluorescent product with maximum excitation and emission wavelengths of 540/575 nm respectively.
FeRhoNox-1(Fe2+ indicaton) 是一种用于检测活细胞内亚铁离子水平的高灵敏度红色荧光探针。进入细胞后,FeRhoNox-1倾向于聚集在高尔基体中,并生成一种不可逆的红色荧光产物,最大激发波长和发射波长分别为540/575 nm。
本方案仅提供一个指导,请根据您的具体需要进行修改。
1.制备染色液
(1)配置储存液:使用DMSO溶解FeRhoNox-1,配置浓度为1-10mM的储存液。
注意:未使用的储存液分装后在-20℃或-80°C避光保存,避免反复冻融。
(2)配置工作液:用合适的缓冲液(如:无血清和酚红的培养基或PBS)稀释储存液,配制浓度为1-10μM的工作液。
注意:请根据实际情况调整工作液浓度,现用现配。
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2.细胞悬浮染色
(1)悬浮细胞:经4°C、1000g离心3-5分钟,弃去上清液,用PBS清洗两次,每次5分钟。
(2)贴壁细胞:使用PBS清洗两次,加入胰酶消化细胞,消化完成后经1000g离心3-5min。
(3)加入FeRhoNox-1工作溶液重悬细胞,37 °C避光孵育5-30分钟。不同细胞最佳孵育时间不同,请根据具体实验需求自行摸索。
(4)孵育结束后,经1000g离心5分钟,去除上清液,加入PBS清洗2-3次,每次5分钟。
(5)用预温的无血清细胞培养基或PBS重悬细胞,通过荧光显微镜或流式细胞术观察。
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3.细胞贴壁染色
(1)在无菌盖玻片上培养贴壁细胞。
(2)从培养基中移走盖玻片,吸出过量的培养基,将盖玻片放在潮湿的环境中。
(3)从盖玻片的一角加入100μL的染料工作液,轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。
(4) 37 °C避光孵育5-30分钟。不同细胞最佳孵育时间不同,请根据具体实验需求自行摸索。
(5)孵育结束后吸弃染料工作液,使用预温的培养液清洗盖玻片2~3次。
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4.显微镜检测:FeRhoNox-1的最大激发波长和发射波长分别为540/575nm。
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注意事项:
1)荧光染料均存在淬灭问题,请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。
2)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。