Vari Fluor 488-Phalloidin 是 Phalloidin 的荧光衍生物，可对肌丝蛋白特异性标记，在标记时可呈现绿色荧光，可使用 FITC 通道进行荧光成像 (Ex/Em=488 nm/513 nm)。
Vari Fluor 488-Phalloidin is a fluorescent derivative of Phalloidin that specifically labels myofilament proteins and exhibits green fluorescence when labeled, allowing for fluorescence imaging using FITC channels (Ex/Em=488 nm/513 nm)[1].
产品概述:
鬼笔环肽 (Phalloidin) 是从致命的伞形毒蕈蘑菇中分离出来的一种毒素。它是特异性结合于 F-肌动蛋白的双环肽。因此用荧光染料标记的 Phalloidin 可以非常方便的研究 F-肌动蛋白的分布。Phalloidin 内部，在半胱氨酸和色氨酸之间含有不常见的硫醚桥形成内环结构。在 pH 升高时，该硫醚被裂解，Phalloidin 失去对肌动蛋白的亲和力。
Vari Fluor-Phalloidin 是 VF 系列染料标记 Phalloidin 的荧光衍生物，可对肌丝蛋白特异性标记。荧光具有很高的稳定性，可在细胞内保留一周以上。
VF-Phalloidin 的一个单位（T）指染色一个加载细胞的载玻片所用染料的量。
使用方法
VF-Phalloidin 工作液的配制
1.1 制备储存液
取适量甲醇或无菌水溶解棕色管中冻干的粉末，配置母液。
50T 规格染料加入 0.25 mL 溶解液
300T 规格染料加入 1.5 mL 溶解液
注:VF-Phalloidin 储存液建议分装后于 -20 ℃ 或 -80 ℃ 避光保存，长期保存推荐使用甲醇溶解。
1.2 工作液的配制
用预热好的无血清细胞培养基或 PBS 按照 1:40-1:200 稀释储存液，即每 200 μL PBS 稀释 1-5 μL VF-Phalloidin 储备液。
注:请根据实际情况调整 VF-Phalloidin 工作液浓度，且现用现配。
2. 细胞染色（贴壁细胞）
2.1 将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上，用 PBS 清洗 3 次。
2.2 用含有 4%甲醛的 PBS 溶液固定细胞，室温固定 20 min。
注:甲醇可以在固定过程中破坏肌动蛋白。因此最好避免含有任何甲醇的固定剂。优选的固定剂是不含甲醇的甲醛。
2.3 用 PBS 清洗细胞 3 次。
2.4 用含 0.4% Triton X-100 的 PBS 溶液在室温下透化细胞 10 min。
2.5 用 PBS 清洗细胞 3 次。
2.6 加入 200 μL 染料工作液，轻轻晃动使其完全覆盖细胞，室温避光孵育 15-45 分钟。
注:染色体积可根据样本情况进行调节。孵育过程中为避免染液挥发，可将盖玻片放于密封容器内。
2.7 吸去染料工作液，用 PBS 或培养基洗 2-3 次。
2.8 使用荧光显微镜或流式细胞仪在对应通道下进行观察。
注意事项
1.VF-Phalloidin 储存液建议分装后于 -20℃ 或 -80℃ 避光保存，避免反复冻融。-20℃ 可保存 1 个月，-80℃ 可保存半年。2.荧光标记的鬼笔环肽不具有细胞透性，因此没有被广泛用于活细胞标记。然而，有报道称活细胞可能通过胞饮或未知机 制进行标记。一般来说，染色活细胞时需要更多的染料。或者，荧光标记的鬼笔环肽也可被注入到细胞中用于监测肌动蛋白分布和细胞运动。
3.使用前请将产品瞬时离心至管底，再进行后续实验。
4.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品。
5.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
[1]. Borovikov YuS, et al. The effect of phallotoxins on the structure of F-actin in myosin-free ghost muscle fibres of rabbit. FEBS Lett. 1984 Oct 29;176(2):441-3.
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