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LY294002 实验说明书


LY294002 基本信息

LY294002 是一种广谱的 PI3K 抑制剂,分别抑制 PI3Kα、 PI3Kδ 和 PI3Kβ,其IC50为 0.5、 0.57、 0.97 μM。LY294002 还抑制 CK2 、IC50 是98 nm。LY294002 也是一种竞争性的 DNA-PK 抑制剂,可逆地结合到 DNA-PK 的激酶结构域,IC50 是 1.4 μM。LY294002 是一种凋亡激活剂,能阻断自噬体形成。
货号:ajci15212
别名:SF 1101, NSC 697286
化学名:2-morpholin-4-yl-8-phenylchromen-4-one
CAS:154447-36-6
分子式:C19H17NO3
分子量:307.34
纯度:>99%
溶解度:≥ 40.37mg/mL in DMSO, ≥ 13.55mg/mL in EtOH
存储:Store at -20°C
库存:现货

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LY294002 体外活性

LY294002(5μM)可阻断CHO-IR细胞中胰岛素诱导的PKB Ser473磷酸化[1]。当细胞在含有20μM的LY294002的培养基中培养48小时,LoVo和Colo205细胞的增殖显著降低(>80%)。添加LY294002(10–50μM)24小时后,以浓度依赖性方式显著减少DLD-1细胞的数量[2]。当细胞在含有不同浓度LY294002(浓度分别为0、10、25、50和75μM)的培养基中培养24小时和48小时时,细胞增殖以剂量依赖性方式显著降低[3]。

LY294002 体内活性

A组小鼠静脉注射LY294002,可显著抑制来源于DLD-1和LoVo细胞的s.c.肿瘤的生长,平均体积分别为72%(范围48-82%)和55%(范围40-61%)[2]。与对照组相比,使用LY294002(50 mg/kg,75 mg/kg)治疗显著降低了鼻咽癌的平均肿瘤负荷。10 mg/kg或25 mg/kg LY294002治疗在降低肿瘤负荷方面效果较差[3]。

LY294002 激酶实验

使用纯化后的重组酶(IA类和IB类)和1μM ATP,在放射分析中确定LY294002对PI3K的抑制作用。激酶反应在室温(24℃)下进行1小时,并通过加入PBS终止。随后使用S形剂量-反应曲线拟合(可变斜率)确定IC50值。通过激酶选择性筛选建立CK2和GSK3β(糖原合酶激酶3β)抑制。LY294002抑制剂(10 μM)针对 10 μM ATP 中的 Upstate 激酶组进行了测试[4]。

LY294002 细胞实验(仅供参考)

将细胞以 5000 个细胞/孔接种到 96 孔板中。 细胞接种后 24 小时,LY294002溶解在 DMSO 中(0 μmol/L、10 μmol/L、25 μmol/L、50 μmol/L 和 75 μmol/L),去除培养基并更换成LY294002溶液,或 DMSO 仅用于额外的 24 小时和 48 小时。 为了避免 DMSO 对细胞生长的任何非特异性毒性作用,所有实验中 DMSO 的浓度都保持在 0.5%。 将 MTT 染料 (5 mg/mL) 添加到每个孔中。 通过加入 DMSO 终止,并在多孔板读数器上测量 490 nm 处的光密度。 减去不存在细胞时培养基的背景吸光度。 所有样品一式三份测定,并计算每个实验的平均值。[3]。 细胞系:结肠癌细胞系 DLD-1、LoVo、HCT15 和 Colo205

LY294002 动物实验(仅供参考)

无胸腺裸鼠在6-8周时开始实验, 将小鼠随机分为五组(n = 4 只)。 小鼠被安置在具有受控温度、湿度和 12 小时光/暗循环的相同环境中。 将 CNE-2Z 细胞(1 × 10^6 细胞/小鼠,在 200 μl RPMI-1640 中)皮下接种到小鼠的侧腹中。 肿瘤取瘤率为100%。 1周后,对异种移植小鼠进行不同剂量的LY294002(10 mg/kg、25 mg/kg、50 mg/kg和75 mg/kg每周两次(n = 4只小鼠))腹腔注射 4周。治疗的小鼠监测所有行为迹象,每周测量两次体重和肿瘤大小。使用卡尺测量肿瘤大小并计算肿瘤体积(体积=长轴×短轴^2)。[3]

LY294002质检

  1. HNMR检测:考虑到溶解性,我们采用氘代DMSO作溶剂,400MHz核磁共振波谱仪检测样品氢谱,从化合物结构分析17个氢均出,从HNMR谱图可看出产品纯度非常高,各氢个数、化学位移及归属与理论完全相符,且无杂质峰,纯度>99%。
    LY294002质检HNMR

  2. HPLC检测:同时我们还做了高效液相色谱(HPLC)检测,选取214 nm波长,产品在保留时间5.656出峰,纯度为99.93%。
    LY294002质检HPLC

参考文献

[1]Chaussade C, et al. Evidence for functional redundancy of class IA PI3K isoforms in insulin signalling. Biochem J. 2007 Jun 15;404(3):449-58.

[2]. Semba S, et al. The in vitro and in vivo effects of 2-(4-morpholinyl)-8-phenyl-chromone (LY294002), a specific inhibitor of phosphatidylinositol 3'-kinase, in human colon cancer cells. Clin Cancer Res. 2002 Jun;8(6):1957-63.

[3]. Jiang H, et al. Phosphatidylinositol 3-kinase inhibitor(LY294002) induces apoptosis of human nasopharyngeal carcinoma in vitro and in vivo. J Exp Clin Cancer Res. 2010 Apr 22;29:34.

[4]. Gharbi SI, et al. Exploring the specificity of the PI3K family inhibitor LY294002. Biochem J. 2007 May 15;404(1):15-21.

[5]. Chen Y, Sun Y, Zhao W, et al. Elevated SRC3 expression predicts pemetrexed resistance in lung adenocarcinoma[J]. Biomedicine & Pharmacotherapy. 2020, 125: 109958.

[6]. Wen Y, Peng D, Li C, et al. A new polysaccharide isolated from Morchella importuna fruiting bodies and its immunoregulatory mechanism[J]. International Journal of Biological Macromolecules. 2019, 137: 8-19.


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