YnLac蛋白质乳酸化探针
YnLac基本信息
YnLac ,化学名:sodium (S)-2-hydroxypent-4-ynoate，是乳酸的炔基衍生物，可以与叠氮荧光试剂发生点击反应（click），作为乳酸化蛋白的代谢追踪研究。YnLac 代谢掺入乳化蛋白中，并直接标记组蛋白的已知乳化赖氨酸，实现了对蛋白质乳酸化的精准捕获。
分子设计逻辑：
保留L-乳酸手性碳骨架，维持天然代谢途径兼容性
甲基位引入末端炔基，点击化学标记位点（生物正交基团）
钠盐形式，增强细胞膜通透性
| 包装（需要更多包装请咨询） | 价格（￥） | 纯度 | 库存 | 购买 |
|---|---|---|---|---|
| 50mg | 2800 | ＞99% | 现货 | |
| 100mg | 5000 | ＞99% | 现货 | |
| 250mg | 10000 | ＞99% | 现货 | |
| 1g | 咨询 | ＞99% | 现货 |
研究组蛋白乳酸化的意义
研究表明，组蛋白乳酸化具有生理相关性，并有助于表观遗传基因调控。例如，在促炎巨噬细胞中，细胞内乳酸可以刺激稳态基因启动子上的组蛋白 H3 乳基化，从而激活其表达。后来的研究表明，组蛋白乳酸化在多种生物学条件下起着关键的调控作用，如细胞状态转变、细胞重编程，神经元兴奋，肿瘤发生，糖代谢，等等。
YnLac标记蛋白染色实验步骤
HeLa细胞实验流程：
1.细胞培养与标记:
将HeLa细胞接种于灭菌盖玻片上，在培养基中加入YnLac（终浓度 20 mM，使用2 mM PBS母液稀释）。
对照组：加入等体积PBS作为载体对照。
37°C标记 12小时。
2.固定与透化：
用预热的PBS洗涤细胞1次。
4%多聚甲醛（PBS配制）室温固定 10分钟。
冰浴PBS洗涤2次。
0.3% Triton X-100（PBS配制）室温透化;>10分钟。
3% BSA（PBS配制）室温封闭>30分钟。
PBS轻柔振荡洗涤3次（每次5分钟）。
3.点击化学反应：
用新鲜配制的点击反应混合液室温孵育1小时：
50 µM 叠氮-罗丹明 | 1 mM TCEP | 100 µM TBTA | 1 mM CuSO₄·5H₂O（溶剂：PBST，含0.1% Tween-20）。4.洗涤与染色:
用含1% Tween-20的PBS轻柔洗涤3次。
Hoechst 33342 染色细胞核。
5.共聚焦成像（Nikon A1R）：
Hoechst通道:
激发光：405 nm
发射光收集：425-475 nm
罗丹明通道：
激发光：561 nm
发射光收集：570-620 nm
关键术语说明：
YnLac：炔基标记的乳糖类似物，用于代谢标记
点击化学反应：铜催化叠氮-炔环加成（CuAAC），实现荧光探针特异性标记
透化剂：Triton X-100溶解细胞膜，促进试剂渗透
TBTA：铜配体，稳定催化反应
以上内容引自：Yanan Sun, Yanchi Chen, and Tao Peng.A Bioorthogonal Chemical Reporter for the Detection and Identification of Protein Lactylation.Electronic Supplementary Material (ESI) for Chemical Science. This journal is © The Royal Society of Chemistry 2022
