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bis-ANS (potassium salt)

一种高亲和力非共价外源荧光染料

此产品仅用于科学研究，我们不为任何个人用途提供产品和服务

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  • 货号: ajci70126
  • CAS: 65664-81-5
  • 别名: 4,4'-二苯胺基-1,1'-联萘-5,5'-二磺酸二钾盐,4,4'-Dianilino-1,1'-binaphthyl-5,5'-disulfonic Acid
  • 分子式: C32H22N2O6S2?2K
  • 分子量: 672.9
  • 纯度: >98%
  • 溶解度: 30 mg/ml in DMSO, 30 mg/ml in DMF, Slightly soluble in Ethanol
  • 储存: Store at -20°C, protect from light
  • 库存: 现货

Background

bis-ANS是一种用于分析蛋白质构象的高亲和力非共价外源荧光染料。[1]它与蛋白质的主要相互作用是通过其疏水的苯环和萘环。[2] bis-ANS具有390 nm的最大激发。[3]当在溶液中游离时，它具有523 nm的最大发射，但是当与蛋白质结合时，随着荧光强度的增加而经历蓝移；例如，当与肠脂肪酸结合蛋白(FAPB2)结合时，它具有484-496 nm的最大发射。bis-ANS已被用于标记急性脑切片中机械损伤的神经元。4它还能有效抑制微管装配。[5],[6]


Reference:
[1]. Hawe, A., Sutter, M., and Jiskoot, W. Extrinsic fluorescent dyes as tools for protein characterization. Pharm. Res. 25(7), 1487-1499 (2008).
[2]. Bothra, A., Bhattacharyya, A., Mukhopadhyay, C., et al. A fluorescence spectroscopic and molecular dynamics study of bis-ANS/protein interaction. J. Biomol. Struct. Dyn. 15(5), 959-966 (1998).
[3]. Pastukhov, A.V., and Ropson, I.J. Fluorescent dyes as probes to study lipid-binding proteins. Proteins 53(3), 607-615 (2003).
[4]. Mozes, E., Hunya, A., Toth, A., et al. A novel application of the fluorescent dye bis-ANS for labeling neurons in acute brain slices. Brain Res. Bull. 86(3-4), 217-221 (2011).
[5]. Horowitz, P., Prasad, V., and Luduena, R.F. Bis(1,8-anilinonaphthalenesulfonate). A novel and potent inhibitor of microtubule assembly. J. Biol. Chem. 259(23), 14647-14650 (1984).
[6]. Mazumdar, M., Parrack, P.K., Mukhupadbhyay, K., et al. Bis-ANS as a specific inhibitor for microtubule-associated protein induced assembly of tubulin. Biochemistry 31(28), 6470-6474 (1992).

Protocol

本方案仅提供一个指导，请根据您的具体需要进行修改。


1、 制备bis-ANS染色液：


（1）配置染料储存液：将bis-ANS溶于DMSO中，配置浓度为5-50mM的储存液。储存液分装后在-20 °C避光保存。


（2）使用合适的缓冲液(如:无血清培养基，HBSS或PBS)稀释储存液，配制浓度为5-50μM的bis-ANS工作液，使用0.22μm滤膜过滤除菌。


注意：请根据实际情况调整bis-ANS工作液浓度，现用现配。


2、细胞悬浮染色(以6 孔板为例)


（1）悬浮细胞经1000g离心3-5min。弃去上清液，使用PBS清洗两次，每次5分钟。


（2）贴壁细胞使用PBS清洗两次，加入胰酶消化细胞，消化完成后经1000g离心3-5min。


（3）加入1mL染料工作液重悬细胞，室温避光孵育15-30分钟，不同细胞最佳培养时间不同。


（4）孵育结束后，经1000g离心5分钟，去除上清液，加入PBS清洗2-3次，每次5分钟。


（5）使用无血清细胞培养基或PBS重悬细胞，通过荧光显微镜或流式细胞技术进行观察。


3、细胞贴壁染色


（1）在无菌盖玻片上培养贴壁细胞。


（2）从培养基中移走盖玻片，吸出过量的培养基，加入PBS清洗1-2次，并将盖玻片放在潮湿的环境中。


（3）从盖玻片的一角加入100μL染料工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞，室温避光孵育15-30分钟。


（4）吸弃染料工作液，使用PBS清洗盖玻片2~3次，每次5分钟。


4、bis-ANS检测蛋白表面疏水性变化


（1）使用5-50μM的bis-ANS工作液稀释蛋白，至蛋白终浓度为5-10μM。请根据具体实验需求选定合适的染料工作浓度。


（2）使用荧光分光光度计记录400-600 nm处的发射光谱，减去缓冲液中游离bis-ANS的荧光信号。


5、显微镜检测：使用光学显微镜或流式细胞仪对染色细胞进行检测，bis-ANS的最大激发光为390 nm。溶液中游离bis-ANS的最大发射光为523 nm，但与蛋白结合后发生蓝移，荧光强度增加，最大发射光转移至484-496 nm。


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注意事项：


1）荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。


2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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