Di-4-ANEPPS是一种快速响应的膜电位染料，用于检测膜电位变化
Di-4-ANEPPS is a fast-response membrane potential dye used to detect changes in membrane potential[1]. Di-4-ANEPPS fluoresces to potential changes through very rapid structural changes, so they are suitable for detecting fast and transient potential changes in cells. Di-4-ANEPPS is rapidly internalized in cells and is therefore mainly used in short-term experiments[2]. Di-4-ANEPPS is a highly water-soluble microinjection, the fluorescence is not affected by cell and tissue types, and can be used to measure membrane potential in various tissues and cell types as well as in artificial membranes. Di-4-ANEPPS is a common tool for mapping cardiac electrical activity[3].
Di-4-ANEPPS是一种快速响应的膜电位染料，用于检测膜电位变化[1]。Di-4-ANEPPS通过非常快速的结构变化对电位变化发出荧光，因此它们适合于检测细胞中快速和瞬态的电位变化。Di-4-ANEPPS在细胞中迅速内化，因此主要用于短期实验[2]。Di-4-ANEPPS是高度水溶性的微量注射剂，荧光不受细胞和组织类型的影响，能够用于测量各种组织和细胞类型以及人造膜中的膜电位。Di-4-ANEPPS是绘制心脏电活动的常用工具[3]。
参考文献:
[1]. Maria Pura Hortigon-Vinagre, et al. The Use of Voltage Sensitive Dye di-4-ANEPPS and Video-Based Contractility Measurements to Assess Drug Effects on Excitation-Contraction Coupling in Human-Induced Pluripotent Stem Cell-Derived Cardiomyocytes. 2021 Mar 1;77(3):280-290. doi: 10.1097/FJC.0000000000000937.
[2]. LM Loew - Pure and Applied Chemistry. Potentiometric dyes: imaging electrical activity of cell membranes.1996 - degruyter.com
[3]. Marina Ronzhina, et al. Di-4-ANEPPS Modulates Electrical Activity and Progress of Myocardial Ischemia in Rabbit Isolated Heart. 2021 Jun 10;12:667065. doi: 10.3389/fphys.2021.667065. eCollection 2021.
本方案仅提供一个指导，应根据您的具体需要进行修改。
1.细胞膜染色液制备
(1)配置DMSO或EtOH 储存液:储存液用DMSO或EtOH配置,浓度1~5mM。
注意:未使用的储存液分装保存在-20℃，避免反复冻融。
(2)工作液制备:用合适的缓冲液(如:无血清培养基，HBSS或PBS)稀释储存液，配制浓度为0.5~10μM的工作液。
注意:工作液的最终浓度是根据不同细胞和实验的经验来配制。可以从推荐浓度的十倍以上寻找最佳条件。
?
2.悬浮细胞染色
(1)悬浮细胞经4°C、1000-1500rpm离心3-5分钟，弃去上清液。用PBS清洗两次，每次5分钟。
(2)加入1mL的Di-4-ANEPPS工作溶液，室温孵育5-30分钟，不同的细胞最佳培养时间不同。
(3)孵育结束后，经1000-1500rpm离心5分钟，去除上清液，加入PBS清洗2-3次，每次5分钟。
(4)用预温的无血清细胞培养基或PBS重悬细胞。通过荧光显微镜或流式细胞术观察。
?
3.粘壁细胞染色
(1)在无菌盖玻片上培养贴壁细胞。
(2)从培养基中移走盖玻片，吸出过量的培养基，将盖玻片放在潮湿的环境中。
(3)从盖玻片的一角加入100uL的染料工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。
(4)室温条件下孵育5-30分钟，不同的细胞最佳培养时间不同。
(5)吸弃染料工作液，用培养液洗盖玻片2~3次。
4.显微镜检测：Di-4-ANEPPS的激发/发射光分别为495/705nm。
?
注意事项：
1）荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
动态评分
0.0