Bafilomycin A1(巴佛洛霉素 A1)自噬抑制实验
基本信息
Bafilomycin A1（巴佛洛霉素A1）是一种大环内酯类抗生素，特异性，可逆的H+-ATPase（V-ATPase）抑制剂，IC50 值是 4-400 nmol/mg，在晚期也被用作自噬抑制剂。巴佛洛霉素A1阻断自噬体-溶酶体融合，也可以抑制细胞溶酶体中的酸化和蛋白质降解，具有诱导调亡的作用 。
货号：ajci19436
别名：NSC 381866；Bafilomycin A1；巴佛洛霉素A1；Baf-A1
CAS：88899-55-2
分子式：C35H58O9
分子量：622.84
溶解：二甲基亚砜：5 mg/ml
存储：Store at -20°C
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体外研究
用Bafilomycin A1（巴佛洛霉素A1）处理不同类型的膜ATP酶，真菌（N.crassa）、植物（Z.mays）和动物（牛延髓）的液泡ATP酶,其I50为400 nmol/mg、4 nmol/mg和50 nmol/mg。I50值是指每毫克蛋白质中Bafilomycin A1的μmol，对ATP酶活性的抑制率为50%[1]
Bafilomycin A1通过抑制V-ATP酶依赖性酸化和CaP 60A/SERCA依赖性自噬体-溶酶体融合,破坏自噬通量[2]。
低浓度（1nm）时，能有效且特异地抑制和杀死pediatric B-cell急性淋巴细胞白血病细胞。针对自噬途径的早期和晚期、线粒体为靶点，并诱导caspase非依赖性凋亡。Bafilomycin A1诱导Beclin 1与Bcl-2结合，进一步抑制自噬并促进凋亡细胞死亡[5]。
Bafiromycin A1阻碍BEL-7402肝细胞癌和HO-8910卵巢癌细胞系的生长，并抑制转移潜能。透射电子显微镜和capsase-3和-9分析表明Bafilomycin A1诱导细胞凋亡[6]。
Bafilomycin A1可剂量依赖性地抑制多种培养细胞的生长，包括无论是否转化的金黄地鼠胚胎和NIH-3T3成纤维细胞，以及PC12和HeLa细胞，其抑制细胞生长的IC50范围为10至50 nM[7]
体内研究
低剂量Bafilomycin A1（0.1 mg/kg）略微慢性治疗抑制肿瘤体积，但最终肿瘤体积与对照组无显著差异。然而，与对照组相比，高剂量1 mg/kg慢性治疗21天后显著抑制肿瘤生长[8]
细胞实验
使用0.05%胰蛋白酶收集细胞并悬浮在含有10%FCS的培养基中，并将200µL悬浮液添加到96孔板的每个孔中。细胞培养20小时以粘附。将Bafilomycin A1（巴佛洛霉素 A1） 添加到孔中，终浓度为 200、400 和 800 nM，一式三份。 在 24、48 和 72 小时，将 20 µl WST-1 添加到细胞中。 然后在 37°C 下孵育 4 小时，使用 675 nm 参比使用分光光度计读取板，以确定 435 nm 处的光密度 (OD)。[2]
动物实验
小鼠：将Tumor-bearing mice随机分为三个实验组：低剂量Bafilomycin A1（0.1 mg/kg/天）治疗组（n=5）、高剂量巴佛洛霉素A1（1 mg/kg/天）治疗组（n=5）和对照组（n=5）。测量肿瘤大小并计算肿瘤体积倍增时间[4]
质量检测
由于Bafilomycin A1（巴佛洛霉素 A1）分子有58个氢，为了让氢能更好裂分，我们采用氘代乙腈作溶剂，600MHz核磁共振波谱仪检测样品，从结果分析，样品无杂质峰，58个氢归属及数量均正确，纯度＞98%。
参考文献
[1]. Haematologica. 2015 Mar;100(3):345-56.
[2]. Exp Ther Med. 2015 Nov;10(5):1829-1834.
[3]. Ohkuma S, et al. Inhibition of cell growth by bafilomycin A1, a selective inhibitor of vacuolar H(+)-ATPase. In Vitro Cell Dev Biol Anim. 1993 Nov;29A(11):862-6.
[4]. J Pathol. 1998 Jul;185(3):324-30.
[5]. Autophagy. 2015;11(8):1437-1438.
[6]. Haematologica. 2015;100(3):345-356.
[7]. J Biol Chem. 1991;266(26):17707-17712
[8]. Bowman EJ, et al. Bafilomycins: a class of inhibitors of membrane ATPases from microorganisms, animal cells, and plant cells. Proc Natl Acad Sci U S A. 1988;85(21):7972-7976.
[9].Antimicrob Agents Chemother. 1997;41(1):212-214.
