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Bafilomycin A1(巴佛洛霉素 A1)自噬抑制实验


基本信息

Bafilomycin A1(巴佛洛霉素A1)是一种大环内酯类抗生素,特异性,可逆的H+-ATPase(V-ATPase)抑制剂,IC50 值是 4-400 nmol/mg,在晚期也被用作自噬抑制剂。Bafilomycin A1(巴佛洛霉素A1)阻断自噬体-溶酶体融合,也可以抑制细胞溶酶体中的酸化和蛋白质降解,其可以诱导调亡 。

货号:ajci19436

别名:NSC 381866;Bafilomycin A1;巴佛洛霉素A1;Baf-A1

CAS:88899-55-2
分子式:C35H58O9
分子量:622.84

溶解度:二甲基亚砜:5 mg/ml

存储:Store at -20°C

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体外研究

用Bafilomycin A1(巴佛洛霉素A1)处理不同类型的膜ATP酶,真菌(N.crassa)、植物(Z.mays)和动物(牛延髓)的液泡ATP酶,其I50为400 nmol/mg、4 nmol/mg和50 nmol/mg。I50值是指每毫克蛋白质中Bafilomycin A1的μmol,对ATP酶活性的抑制率为50%[1]


Bafilomycin A1通过抑制V-ATP酶依赖性酸化和CaP 60A/SERCA依赖性自噬体-溶酶体融合,破坏自噬通量[2]。


低浓度(1nm)时,能有效且特异地抑制和杀死pediatric B-cell急性淋巴细胞白血病细胞。针对自噬途径的早期和晚期、线粒体为靶点,并诱导caspase非依赖性凋亡。Bafilomycin A1诱导Beclin 1与Bcl-2结合,进一步抑制自噬并促进凋亡细胞死亡[5]。


Bafiromycin A1阻碍BEL-7402肝细胞癌和HO-8910卵巢癌细胞系的生长,并抑制转移潜能。透射电子显微镜和capsase-3和-9分析表明Bafilomycin A1诱导细胞凋亡[6]。


Bafilomycin A1(巴佛洛霉素A1)可剂量依赖性地抑制多种培养细胞的生长,包括无论是否转化的金黄地鼠胚胎和NIH-3T3成纤维细胞,以及PC12和HeLa细胞,其抑制细胞生长的IC50范围为10至50 nM[7]

体内研究

低剂量Bafilomycin A1(0.1 mg/kg)略微慢性治疗抑制肿瘤体积,但最终肿瘤体积与对照组无显著差异。然而,与对照组相比,高剂量1 mg/kg慢性治疗21天后显著抑制肿瘤生长[8]

细胞实验

使用0.05%胰蛋白酶收集细胞并悬浮在含有10%FCS的培养基中,并将200µL悬浮液添加到96孔板的每个孔中。细胞培养20小时以粘附。将Bafilomycin A1(巴佛洛霉素 A1) 添加到孔中,终浓度为 200、400 和 800 nM,一式三份。 在 24、48 和 72 小时,将 20 µl WST-1 添加到细胞中。 然后在 37°C 下孵育 4 小时,使用 675 nm 参比使用分光光度计读取板,以确定 435 nm 处的光密度 (OD)。[2]

动物实验

小鼠:将Tumor-bearing mice随机分为三个实验组:低剂量Bafilomycin A1(巴佛洛霉素A1)(0.1 mg/kg/天)治疗组(n=5)、高剂量巴佛洛霉素A1(1 mg/kg/天)治疗组(n=5)和对照组(n=5)。测量肿瘤大小并计算肿瘤体积倍增时间[4]

质量检测

由于Bafilomycin A1(巴佛洛霉素 A1)分子有58个氢,为了让氢能更好裂分,我们采用氘代乙腈作溶剂,600MHz核磁共振波谱仪检测样品,从结果分析,样品无杂质峰,58个氢归属及数量均正确,纯度>98%。

Bafilomycin A1核磁氢谱

参考文献

[1]. Yuan N, et al. Bafilomycin A1 targets both autophagy and apoptosis pathways in pediatric B-cell acute lymphoblastic leukemia. Haematologica. 2015 Mar;100(3):345-56. 

[2]. Lu X, et al. Bafilomycin A1 inhibits the growth and metastatic potential of the BEL-7402 liver cancer and HO-8910 ovarian cancer cell lines and induces alterations in their microRNA expression. Exp Ther Med. 2015 Nov;10(5):1829-1834. 

[3]. Ohkuma S, et al. Inhibition of cell growth by bafilomycin A1, a selective inhibitor of vacuolar H(+)-ATPase. In Vitro Cell Dev Biol Anim. 1993 Nov;29A(11):862-6. 

[4]. Ohta T, et al. Bafilomycin A1 induces apoptosis in the human pancreatic cancer cell line Capan-1. J Pathol. 1998 Jul;185(3):324-30. 

[5]. Mauvezin C, et al. Bafilomycin A1 disrupts autophagic flux by inhibiting both V-ATPase-dependent acidification and Ca-P60A/SERCA-dependent autophagosomelysosome fusion. Autophagy. 2015;11(8):1437-1438. 

[6]. Yuan N, et al. Bafilomycin A1 targets both autophagy and apoptosis pathways in pediatric B-cell acute lymphoblastic leukemia. Haematologica. 2015;100(3):345-356. 

[7]. Yoshimori T, et al. Bafilomycin A1, a specific inhibitor of vacuolar-type H(+)-ATPase, inhibits acidification and protein degradation in lysosomes of cultured cells. J Biol Chem. 1991;266(26):17707-17712 

[8]. Bowman EJ, et al. Bafilomycins: a class of inhibitors of membrane ATPases from microorganisms, animal cells, and plant cells. Proc Natl Acad Sci U S A. 1988;85(21):7972-7976. 

[9]. Cattani L, et al. Bafilomycin A1 and intracellular multiplication of Legionella pneumophila. Antimicrob Agents Chemother. 1997;41(1):212-214.


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